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Tipo do documento: Tese
Título: Análise das interações celulares envolvidas na regeneração do rim após o transplante de células mononucleares de medula óssea em ratos com hipertensão renovascular
Título(s) alternativo(s): Analysis of cellular interactions involved in kidney regeneration after bone marrow mononuclear cell transplantation in rats with renovascular hypertension
Autor: Fernandes, Mariana de Freitas Oliveira 
Primeiro orientador: Carvalho, Laís de
Primeiro coorientador: Thole, Alessandra Alves
Primeiro membro da banca: Machado, Ana Carolina Stumbo
Segundo membro da banca: Carvalho, Simone Nunes de
Terceiro membro da banca: Rocha, Vinícius Novaes
Quarto membro da banca: Lamas, Marcelo Einicker
Resumo: A doença renal crônica (DRC) é um problema de saúde pública que afeta milhares de pessoas em todo o mundo. Até o momento não existe tratamento específico para a DRC e o tratamento substitutivo da função renal, como diálise ou transplante renal é uma alternativa disponível. No entanto, devido ao alto custo dos tratamentos e a carência de órgãos, se faz necessário a busca por novas terapias, como a terapia celular utilizando as células-tronco. A terapia com células-tronco tem se destacado como um tratamento potencial para doenças crônicas, como a hipertensão renovascular. Porém, é necessário um entendimento maior da comunicação entre as células danificadas na presença das células-tronco transplantadas. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos do transplante de células mononucleares de medula óssea (CMMO) na comunicação celular de células renais residentes de ratos com hipertensão renovascular induzida pelo modelo 2rins1clipe (2R1C). Ratos 2R1C receberam CMMO de ratos Lewis eGFP na região subcapsular quatro semanas após a clipagem. Então, 24 horas, 48 horas, 7 dias e 15 dias após o transplante das CMMO, os animais foram eutanasiados e os rins esquerdos foram coletados. A pressão arterial sistólica (PAS) foi mensurada semanalmente e os níveis de proteínas totais, creatinina e ureia, em amostras de plasma e urina, foram avaliados. Além disso, a morfologia, fibrose e a expressão de N- e E-caderina, renina, conexina 40 e nefrina foram investigadas por imunoperoxidase, imunofluorescência e western blotting. As CMMO GFP+ transplantadas foram quantificadas por citometria de fluxo e localizadas através da imunofluorescência. A terapia com CMMO GFP+ melhorou a função renal dos animais 2R1C, normalizando os níveis plasmáticos das proteínas totais, creatinina e ureia enquanto reduziu proteinúria e leucocitúria e ainda restaurou a expressão de nefrina. Além da função renal, a terapia celular levou ao restabelecimento da citoarquitetura do parênquima renal com a reestruturação de glomérulos e túbulos, junto com a redução da fibrose e do infiltrado celular. A expressão de N- e E-caderina foi restaurada, acompanhada desta melhora morfofuncional após o transplante das CMMO GFP+. A expressão da conexina 40 também foi restaurada, enquanto que a expressão de renina foi reduzida, contribuindo para a redução da PAS. A expressão da renina foi restrita às células justaglomerulares após transplante das CMMO GFP+. Também observamos que as CMMO GFP+ injetadas foram localizadas próximas aos glomérulos e túbulos no parênquima renal, preferencialmente nas regiões mais fibrosadas. Além disso, as CMMO GFP+ foram encontradas após 15 dias do transplante, aparentemente migrando do córtex para a medula ao longo do tempo. Portanto, estes dados sugerem que o transplante CMMO GFP+ foi capaz de melhorar os efeitos sistêmicos e locais causados pela estenose da artéria renal esquerda, promovendo a restauração da comunicação célula-célula nos segmentos tubular e glomerular, acompanhada pela restauração morfofuncional do rim de ratos 2R1C.
Abstract: Chronic kidney disease (CKD) is a public health problem that affects thousands of people around the world. So far, there is no treatment for CKD and the substitutive treatment of renal function such as dialysis or renal transplantation is an available alternative. Therefore, due to the elevated treatment cost and organ shortage stimulates the search for new therapies such as stem cell-therapy. The stem cell-therapy has been highlighted as a potential treatment for chronic diseases like renovascular hypertension. However, a greater understanding of the communication between damaged cells when transplanted stem cells is needed. The aim this study was to evaluate bone marrow mononuclear cell (BMMC) transplantation effects in cellular communication of resident renal cells from renovascular hypertension rats induced by 2kidneys-1clip (2K1C) model. 2K1C rats with renovascular hypertension, induced by left renal artery stenosis, received BMMC from eGFP Lewis rats in the subcapsular region four weeks after clipping. Then, 24 hours, 48 hours, 7 days and 15 days after BMMC transplantation, animals were euthanized, and left kidney was collected. Systolic blood pressure (SBP) was measured weekly and total protein, creatinine and urea levels in plasma and urine samples were evaluated. In addition, morphology, fibrosis and N- and E-cadherin, renin, connexin 40 and nephrin expression were investigated by immunoperoxidase, immunofluorescence and western blotting. The transplanted GFP+ BMMC were quantified by flow cytometry and localized through immunofluorescence. GFP+ BMMC therapy improved renal function of 2K1C animals by normalizing plasma total protein, creatinine and urea levels while reducing proteinuria and leukocyturia and still restored nephrin expression. In addition to renal function, cell therapy led to the reestablishment of renal parenchymal cytoarchitecture with glomeruli and tubules restructuring along with reduction of fibrosis and cellular infiltrate, reflecting clipped and contralateral kidneys sizes smaller discrepancy. N- and E-cadherin expression was restored, accompanied by this morpho functional improvement after GFP+ BMMC transplantation. Connexin 40 expression was also restored whereas reduced renin expression contributing to reduction of SBP. Renin expression was restricted to juxtaglomerular cells after GFP+ BMMC transplantation. We also observed injected GFP+ BMMC were located near the glomeruli and tubules in the renal parenchyma preferably in fibrous regions. In addition, GFP+ BMMC were still found after 15 days of transplantation, seemingly migrating from cortex to medulla over time. Therefore, these data suggest GFP+ BMMC transplantation was able to improve systemic and local effects caused by left renal artery stenosis promoting cell-cell communication restoration in tubular and glomerular segments, accompanied by morphofunctional recovery of 2K1C rats kidney.
Palavras-chave: Bone marrow Mononuclear cells
2K1C
Cell-cell communication
Cadherins
Connexins
Células mononucleares de medula óssea
2R1C
Comunicação célula-célula
Caderinas
Conexinas
Células da medula óssea
Hipertensão renovascular
Rins Transplante
Caderinas
Conexinas
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::PARASITOLOGIA
Idioma: por
País: BR
Instituição: Universidade do Estado do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UERJ
Departamento: Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas
Programa: Programa de Pós-Graduação em Fisiopatologia Clínica e Experimental
Citação: FERNANDES, Mariana de Freitas Oliveira. Análise das interações celulares envolvidas na regeneração do rim após o transplante de células mononucleares de medula óssea em ratos com hipertensão renovascular. 2017. 97 f. Tese (Doutorado em Fisiopatologia Clínica e Experimental) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2017.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/12572
Data de defesa: 7-Ago-2017
Aparece nas coleções:Doutorado em Fisiopatologia Clínica e Experimental

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