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Tipo do documento: Tese
Título: Achromobacter spp na Fibrose Cística: Identificação das espécies, susceptibilidade a antimicrobianos e atributos de virulência
Título(s) alternativo(s): Achromobacter spp in Cystic Fibrosis: Species identification, antibiotic susceptibility and virulence attributes
Autor: Pereira, Rosana Helena Vicente 
Primeiro orientador: Marques, Elizabeth de Andrade
Primeiro coorientador: Assef, Ana Paula D'alincourt Carvalho
Primeiro membro da banca: Queiroz, Mara Lucia Penna
Segundo membro da banca: Leão, Robson de Souza
Terceiro membro da banca: Neves, Felipe Piedade Gonçalves
Quarto membro da banca: Carvalho, Karyne Rangel
Resumo: O gênero Achromobacter, sobretudo, A. xylosoxidans, tem se destacado como um importante patógeno pulmonar relacionado à Fibrose Cística (FC). A identificação das espécies é dificultada pela similaridade fenotípica e genotípica entre elas, o que pode subestimar a real frequência e o significado das diferentes espécies. Fatores relacionados à virulência e resistência a antimicrobianos são pouco conhecidos. O objetivo deste estudo foi comparar diferentes metodologias para a identificação de espécies de Achromobacter spp; analisar os perfis de resistência a antimicrobianos; e estudar atributos de virulência (biofilme e tipos de motilidades) em amostras isoladas de pacientes com FC, atendidos em dois centros de referência do Rio de Janeiro. Foram analisadas 129 amostras de Achromobacter spp obtidas de 38 pacientes. As amostras foram identificadas por testes fenotípicos, por sequenciamento anterior do gene rrs e por PCR para detecção do gene blaOXA-114-like, intrínseco de A. xylosoxidans. A relação clonal foi avaliada por Eletroforese em Campo Pulsado (PFGE). Os testes fenotípicos e o sequenciamento identificaram 93,8% (n=122) das amostras como A. xylosoxidans, uma como A. denitrificans. e sete foram identificadas apenas em gênero. As 122 amostras foram positivas para o gene blaOXA-114-like. O PFGE mostrou 22 grupos clonais. Foram selecionadas 63 amostras, representativas de cada grupo clonal por paciente, para a identificação por Analise de Restrição de DNA ribossomal amplificado (ARDRA). Todas as amostras foram identificadas: 56 (88,9%) A. xylosoxidans, uma (1,5%) A. denitrificans, três A. insolitus (4,8%) e três (4,8%) como A. piechaudii. A maioria (n=101) das 122 amostras de A. xylosoxidans foi forte produtora de biofilme (BF) e apresentou motilidade do tipo swimming (n=118; 96,7%) e swarming (n=99; 81%). Todas as amostras positivas para swarming também foram positivas para swimming. Houve significância entre produção de BF e os tipos de motilidades, sugerindo que estes possam favorecer a produção de BF. As amostras de A. não xylosoxidans, em sua maioria, foram BF, com concomitância dos tipos de motilidades. Das 122 amostras de A. xylosoxidans submetidas à CIM por E-test®, a maioria foi sensível a ceftazidima, imipenem, ciprofloxacin (CIP) e sulfametoxazol/trimetoprim (SUT), Entretanto, 46% das amostras foram não sensíveis a CIP. As sete amostras de A. não xylosoxidans foram sensíveis aos antimicrobianos testados. As 129 amostras de Achromobacter spp foram negativas para os genes blaSPM1, blaVIM 2 e blaKPC2. A distribuição de marcadores de resistência entre os grupos clonais de A. xylosoxidans isolados de pacientes com colonização crônica, mostrou que a resistência a CIP e SUT foram os marcadores de maior ocorrência dentre os grupos clonais. Independente da técnica molecular empregada A xylosoxidans foi a espécie predominante, entretanto não é excludente o envolvimento de espécies emergentes nesse cenário, uma vez que todas mostraram perfil de virulência semelhante a espécie predominante.
Abstract: The genus Achromobacter, especially A. xylosoxidans, has emerged as an important lung pathogen related to Cystic Fibrosis (CF). Species identification is hampered by phenotypic and genotypic similarity between them, which may underestimate the actual frequency and significance of different species. Factors related to virulence and antimicrobial resistance are poorly understood. The aims of this study were to compare different methodologies for identifying species of Achromobacter spp; analyze the antimicrobial resistance profiles, and study virulence attributes (types of motility and biofilm formation) in isolates from CF patients treated at two centers of reference of Rio de Janeiro. A total of 129 Achromobacter spp isolates obtained from 38 patients were analyzed. The isolates were identified by phenotypic testing, by sequencing the gene rrs and PCR for gene blaOXA-114-like intrinsic to A. xylosoxidans. The clonal relatedness was assessed by Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Phenotypic tests and sequencing identified 93.8 % (n=122) of the isolates as A. xylosoxidans, one as A. denitrificans. and seven were identified only at genus. The 122 isolates were positive for blaOXA -114-like gene. The PFGE showed 22 clonal groups. 63 isolates representative of each clonal group per patient were selected for identification by restriction analysis of amplified ribosomal DNA (ARDRA). All samples were identified: 56 (88.9 %) A. xylosoxidans, one (1.5%) A.denitrificans three A. insolitus (4.8%) and three (4.8%) A. piechaudii. The majority (n = 101) of 122 isolates of A. xylosoxidans was strong biofilm (BF) producers and showed motility of swimming type (n=118, 96.7%) and swarming (n=99, 81%). All positive isolates for swarming were also positive for swimming. There was significance between the production of BF and the types of motility, suggesting that they may favor the production of BF. Non xylosoxidans Achromobacter were mostly BF producers, with concurrence of the types of motility. Of the 122 samples of A. xylosoxidans submitted to MIC by E-test®, most were sensitive to ceftazidime, imipenem, ciprofloxacin (CIP) and trimethoprim/sulfamethoxazole (SUT), however, 46 % of the samples were not sensitive to CIP. The seven non xylosoxidans Achromobacter isolates were not susceptible to the antibiotics tested. The 129 Achromobacter spp isolates were negative for blaSPM-1, blaVIM-2 and blaKPC-2 genes. The distribution of resistance markers between the clonal groups of A. xylosoxidans isolated from patients with chronic colonization, showed that resistance to CIP and SUT were most frequent markers among clonal groups. Regardless of the molecular technique employed A. xylosoxidans was the predominant species. However, the role of emerging species cannot be excluded from this scenario, since all showed similar virulence profile of the predominant species.
Palavras-chave: Cystic Fibrosis
Identification
Resistance
Virulence
Fibrose cística
Identificação
Resistência
Virulência
Fibrose cística
Fibrose cística Fisiopatologia
Achromobacter Classificação
Achromobacter denitrificans Patogenicidade
Achromobacter denitrificans Virologia
Resistência Beta Lactâmica Efeito de drogas
Pneumopatias Etiologia
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA
Idioma: por
País: BR
Instituição: Universidade do Estado do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UERJ
Departamento: Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas
Programa: Programa de Pós-Graduação em Microbiologia
Citação: PEREIRA, Rosana Helena Vicente. Achromobacter spp na Fibrose Cística: Identificação das espécies, susceptibilidade a antimicrobianos e atributos de virulência. 2013. 127 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica Humana) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2013.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14372
Data de defesa: 17-Dez-2013
Aparece nas coleções:Doutorado em Microbiologia

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