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Tipo do documento: Tese
Título: Aspectos fenotípicos e genotípicos da formação de biofilme e interação com superfícies abióticas e bióticas no potencial de virulência de Staphylococcus haemolyticus relacionados com quadros de bacteremias
Título(s) alternativo(s): Phenotypic and genotypic aspects of biofilm formation and interaction with abiotic surfaces on the virulence potential of Staphylococcus haemolyticus related to bacteremia
Autor: Ribeiro, Paula Marcele Afonso Pereira 
Primeiro orientador: Guaraldi, Ana Luiza de Mattos
Primeiro coorientador: Pereira, José Augusto Adler
Primeiro membro da banca: Duarte, José Luiz Muniz Bandeira
Segundo membro da banca: Santos, Cintia Silva dos
Terceiro membro da banca: Costa, Renata Garcia
Quarto membro da banca: Vieira, Verônica Viana
Resumo: Staphylococcus haemolyticus resistente à oxacilina (ORSH) é o micro-organismo mais comumente isolado entre os espécimes clínicos de estafilococos resistentes à meticilina. <i>S. haemolyticus</i> é um importante patógeno oportunista causando infecções adquiridas no hospital em todo o mundo, incluíndo doenças como, peritonite, otite, infecções do trato urinário, septicemia e infecções associadas a próteses. A medida em que os fômites contribuem para a disseminação deste patógeno através de pacientes e enfermarias ainda é desconhecida. Além disso, <i>S. haemolyticus</i> tem uma grande capacidade de formação de biofilme e muitas vezes é associado a multi-resistência (MDR), e único entre as espécies de estafilococos pronto para desenvolver resistência aos glicopeptídeos. O objetivo deste estudo foi avaliar os aspectos fenotípicos e genotípicos da interação com superfícies abióticas e bióticas de diferentes tipos clonais de <i>S. haemolyticus</i> isolados de hemoculturas de neonatos e adultos, e cepas isoladas de fômites, bem como a capacidade de produzir biofilme na presença de antimicrobianos. A distribuição clonal foi avaliada pela técnica de eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). As concentrações inibitórias mínimas (CIM) dos antimicrobianos foram avaliadas através do método de microdiluição em caldo. Os ensaios de reação em cadeia da polimerase (PCR) foram realizados para detectar os genes <i>mec</i>A, <i>ica</i>A, <i>aap</i>, <i>atl</i>E, <i>atl</i> e <i>fbp</i>. Cepas de <i>S. haemolyticus</i> crescidas na presença dos antibióticos foram testadas e investigadas para a formação de biofilme em superfícies de vidro, poliestireno e catéter. Os isolados de sangue de cepas de neonatos foram confirmados como <i>S. haemolyticus</i> por seqüenciamento do 16S e agrupados em 6 tipos de eletroforese em gel de campo pulsado, nas cepas de adultos foram encontrados 12 tipos de PFGE ,e para as cepas de fômites, 5 tipos de PFGE. Os testes de susceptibilidade aos antimicrobianos identificaram fenótipos MDR na maioria das cepas. A formação de biofilme foi independente da presença dos genes <i>ica</i>A e <i>mec</i>A, e tipo de PFGE. Vancomicina, Oxacilina e os demais antimicrobianos testados não inibiram a formação do biofilme em superfícies abióticas. As cepas isoladas de fômites apresentaram susceptibilidade apenas a linezolida e vancomicina e foram caracterizadas como MDR. A afinidade e capacidade desta espécie na formação de biofilme pode contribuir para o estabelecimento e disseminação de infecção nosocomial. Os mecanismos moleculares de formação de biofilmes nesta espécie não foram elucidados, particularmente na presença de agentes antimicrobianos. Uma dose sub-letal de vancomicina pode favorecer a formação de biofilme por ORSH de fômites e superfícies de catéter. Outros estudos sobre a presença e expressão do gene ica podem esclarecer os diferentes mecanismos de adesão na patogênese de infecções causadas por <i>S. haemolyticus</i>, incluindo casos associados a dispositivos médicos.
Abstract: Oxacillin-resistant Staphylococcus haemolyticus (ORSH) is the most common microrganism among clinical isolates of methicillin-resistant staphylococci. <i>S. haemolyticus</i> plays an important role in hospital-acquired opportunistic infections worldwide, including peritonitis, otitis, urinary tract infections, septicemia and prosthetic-device-associated infections. The range of fomites contributing to this pathogen dissemination through patients and hospital wards remains unknown. Among staphylococcal species, <i>S. haemolyticus</i> present a unique and large capacity to biofilm formation, often associated to multi-drug resistant (MDR), and may develop resistance to glycopeptides. The aim of this study was to evaluate the interactions of abiotic and biotic surfaces by phenotypic and genotypic aspects with <i>S. haemolyticus</i> different clonal types isolated from blood culture from neonates and adults and strains fomites isolates, as well as the ability to produce biofilm in the presence of antibiotics. Clonal distribution was assessed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Minimum inhibitory concentrations (MICs) of antibiotics were evaluated via broth microdilution method. Polymerase chain reaction (PCR) assays were performed to detect <i>mec</i>A, <i>ica</i>A, <i>aap</i>, <i>atl</i>E, <i>atl</i> and <i>fbp</i> genes. <i>S.haemolyticus</i> strains grown in the presence of the antibiotics tested and were investigated for biofilm formation on glass, polystyrene and catheter surfaces. The neonate strains blood isolates were confirmed as <i>S. haemolyticus</i> by sequencing of the 16S gene and clustered in 6 pulsed-field gel electrophoresis types, in the adults stains, 12 pulsed-field gel electrophoresis types and for strains fomites isolates 5 pulsed-field gel electrophoresis types. Antimicrobial susceptibility tests identified most strains as MDR phenotype. Biofilm formation were independent of the presence of the <i>ica</i>A and <i>mec</i>A genes and PFGE type. On abiotic surfaces, antibiotics tested, including vancomycin and oxacillin did not inhibit the biofilm formation. Fomites isolated strains were characterized as MDR showing susceptibility only to linezolid and vancomycin. The affinity and ability of this species on biofilm-formation may contribute to the establishment and dissemination of nosocomial infection. The molecular mechanisms of biofilm formation in this specie have not been elucidated, particularly in the presence of antimicrobial agents. A sub-lethal dose of vancomycin may favor biofilm formation by ORSH on fomites and catheter surfaces. Further studies related to the presence and expression of ica gene may elucidate different mechanisms of adhesion related to the pathogenesis of infections caused by <i>S. haemolyticus</i>, including cases associated with medical devices.
Palavras-chave: Staphylococcus haemolyticus
Neonates
Fomites
PFGE
Multi-drug resistance
Biofilm
Antimicrobials
Estafilococos haemolyticus
Neonatos
Fômites
PFGE
Multiresistência
Biofilme
Antimicrobianos
Biofilme
Infecções neonatais
Infecções estafilocócicas
Eletroforese em gel
Drogas - Resistência em microorganismos
Antibióticos
Farmacorresistência Bacteriana Múltipla
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::MICROBIOLOGIA APLICADA
Idioma: por
País: BR
Instituição: Universidade do Estado do Rio de Janeiro
Sigla da instituição: UERJ
Departamento: Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas
Programa: Programa de Pós-Graduação em Microbiologia
Citação: RIBEIRO, Paula Marcele Afonso Pereira. Aspectos fenotípicos e genotípicos da formação de biofilme e interação com superfícies abióticas e bióticas no potencial de virulência de Staphylococcus haemolyticus relacionados com quadros de bacteremias. 2018. 96 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica Humana) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2018.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/14375
Data de defesa: 29-Mar-2018
Aparece nas coleções:Doutorado em Microbiologia

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