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http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/16228
Tipo do documento: | Dissertação |
Título: | Avaliação do quimioterápico doxorrubicina como agente fotossensibilizador em culturas de células MDA-MB-231 irradiadas com LED azul |
Título(s) alternativo(s): | Evaluation of doxorubicin chemotherapeutical drug as a photosensitizer agent over MDA-MB-231 cell cultures irradiated with blue LED |
Autor: | Teixeira, Adilson Fonseca ![]() |
Primeiro orientador: | Mencalha, André Luiz |
Primeiro coorientador: | Fonseca, Adenilson de Souza da |
Primeiro membro da banca: | Simão, Tatiana de Almeida |
Segundo membro da banca: | Lima, Sheila Coelho Soares |
Terceiro membro da banca: | Costa, Nathalia de Oliveira Meireles da |
Resumo: | Efeitos colaterais à quimioterapia são comuns a pacientes com câncer de mama triplo negativo. A terapia fotodinâmica poderia complementar este tratamento pela combinação de um cromóforo à radiação não ionizante de baixa potência capaz de gerar estresse oxidativo nas células tumorais. A utilização do quimioterápico doxorrubicina como fotossensibilizador e sua combinação à radiação não ionizante de baixa potência em comprimento de onda adequado poderia reduzir sua dose e efeitos adversos, melhorando a qualidade de vida do paciente. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar efeitos da doxorrubicina como fotossensibilizador associado ao LED azul de baixa potência em culturas de células de câncer de mama humana. Células da linhagem MDA-MB-231 foram cultivadas e submetidas à combinação entre diferentes concentrações de doxorrubicina e fluências de LED azul para avaliar: (i) localização da doxorrubicina por microscopia de fluorescência, (ii) viabilidade celular por WST-1, (iii) produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) por citometria de fluxo, (iv) expressão protéica de NF-κB por imunocitoquímica, e (v) níveis relativos de RNAm de IL1B, IL6 e IL8 através da Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (qPCR). Os resultados obtidos a partir da microscopia de fluorescência demonstram que a doxorrubicina atinge o núcleo de células da linhagem MDA-MB-231 após 2h de incubação, mantendo-se presente neste compartimento celular 24 horas após o tratamento. Comparadas ao controle, culturas somente incubadas com doxorrubicina (25 nM) apresentaram 23% de redução na viabilidade celular, enquanto sua combinação ao LED azul (640 J/cm2) reduziu viabilidade celular em 40% após 24h. Após 48h de tratamento, a viabilidade celular nas culturas somente incubadas com doxorrubicina foi reduzida em 40%, enquanto em combinação ao LED azul a redução foi de 55%. A produção de EROs 30 minutos após o tratamento foi 22% maior nas células incubadas com doxorrubicina e irradiadas com LED azul em comparação às demais condições. Culturas apenas incubadas com doxorrubicina ou incubadas com doxorrubicina e irradiadas com LED azul apresentaram maior expressão protéica de NF-κB em diferentes tempos (30min, 12h e 24h). Comparadas ao controle ou a amostras somente irradiadas com LED azul, amostras apenas incubadas com doxorrubicina ou incubadas com doxorrubicina e irradiadas com LED azul apresentaram maiores níveis de RNAm para IL1B, IL6 e IL8. Estes resultados demonstram que a irradiação com LED azul de baixa potência aumenta a citotoxicidade da doxorrubicina em culturas da linhagem MDA-MB-231, aumenta os níveis de EROs, além de induzir a expressão de fatores pro-inflamatórios. |
Abstract: | Adverse effects are common among triple negative breast cancer patients. Photodynamic therapy could complement their treatment combining a chromophore to low power non-ionizing radiation able to promote oxidative stress in cancer cells. Doxorubicin utilization as a photosensitizer and its combination with low power non-ionizing radiation at optimal wavelength could reduce doxorubicin doses and adverse effects, improving patient s quality of life. Thus, the aim of this work was to evaluate doxorubicin effects as a photosensitizer to low power blue LED on human breast cancer cell cultures. MDA-MB-231 cell cultures were cultivated and submitted to combination of different doxorubicin concentrations and low power blue LED fluences to evaluate: (i) localization of doxorubicin into cell by fluorescence microscopy, (ii) cell viability by WST-1, (iii) reactive oxygen species (ROS) generation by flow cytometry, (iv) NF-κB protein expression by imunocytochemestry, and (v) IL1B, IL6 and IL8 relative mRNA levels by quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR). Results obtained by fluorescence microscopy showed that doxorubicin localizes in MDA-MB-231 cell nuclei 2 hours after incubation, being nuclear doxorubicin staining observed also 24 hours after treatment. Compared to control, cell cultures incubated with doxorubicin (25nM) alone presented a reduction of 23% in cell viability, while doxorubicin combined to blue LED (640 J/cm²) reduced cell viability at 40% 24h after treatment. Cell viability 48h after treatment in cultures incubated with doxorubicin alone was reduced in 40%, while doxorubicin combination with blue LED reduced cell viability in 55%. EROs generation 30 minutes after treatment was 22% higher in cell cultures incubated with doxorubicin and irradiated with blue LED compared to other conditions. Cell cultures incubated with doxorubicin alone and cell cultures incubated with doxorubicin and irradiated with blue LED presented higher NF-κB protein staining at different periods of time (30 min, 12h and 24h). Compared to control not incubated with doxorubicin and not irradiated with blue LED, or compared to cell cultures irradiated with blue LED alone, Il1B, IL6 and IL8 mRNA levels were elevated in cell cultures incubated with doxorubicin alone and in cell cultures incubated with doxorubicin and irradiated with blue LED. These results demonstrate that low power blue LED irradiation increases doxorubicin cytotoxicity in MDA-MB-231 cell cultures, promotes ROS generation and induces pro-inflammatory cytokine expression. |
Palavras-chave: | Breast cancer Photodynamic therapy Doxorubicin Non-ionizing radiation Câncer de mama Terapia fotodinâmica Doxorrubicina Radiação não ionizante Mamas Câncer Quimioterapia Doxorrubicina Fotoquimioterapia Diodos emissores de luz Radiação não ionizante |
Área(s) do CNPq: | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA |
Idioma: | por |
País: | BR |
Instituição: | Universidade do Estado do Rio de Janeiro |
Sigla da instituição: | UERJ |
Departamento: | Centro Biomédico::Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes |
Programa: | Programa de Pós-Graduação em Biociências |
Citação: | TEIXEIRA, Adilson Fonseca. Avaliação do quimioterápico doxorrubicina como agente fotossensibilizador em culturas de células MDA-MB-231 irradiadas com LED azul. 2018. 61 f. Dissertação (Mestrado em Biociências Nucleares; Ecologia) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2018. |
Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/16228 |
Data de defesa: | 13-Jul-2018 |
Aparece nas coleções: | Mestrado em Biociências |
Arquivos associados a este item:
Arquivo | Tamanho | Formato | |
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