Identificação genotípica e fenotípica de leveduras de importância clínica para autenticação em banco de dados de leveduras de Instituição Militar de Saúde

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Tipo do documento:	Dissertação
Título:	Identificação genotípica e fenotípica de leveduras de importância clínica para autenticação em banco de dados de leveduras de Instituição Militar de Saúde
Título(s) alternativo(s):	Genotypic and phenotypic identification of yeasts of clinical importance for authentication in a yeast bank of a Military Health Institution
Autor:	Pinheiro, Eliane Olmo
Primeiro orientador:	Neufeld, Paulo Murillo
Primeiro membro da banca:	Bello, Alexandre Ribeiro
Segundo membro da banca:	Fracalanzza, Sergio Eduardo Longo
Resumo:	Candidíases invasiva continua sendo prevalente causa de morbidade e mortalidade em pacientes imunocomprometidos. Essa forma de candidíase é um dos aspectos mais polimórficos das micoses sistêmicas e, em muitos casos, é um achado terminal. Nas últimas décadas, as tecnologias para identificação de leveduras têm avançado significativamente, com métodos bioquímicos automatizados, ensaios baseados em análise de ácidos nucleicos e proteômicos. Particularmente a proteômica na sua versão Espectrometria de Massas por Tempo de Voo (MALDI-TOF MS), tem se apresentado como uma alternativa promissora para a identificação na rotina de espécies de leveduras. O presente trabalho, teve como objetivo a recuperação de leveduras isoladas de amostras clínicas, a partir de frascos de hemocultura, provenientes do serviço de microbiologia de um hospital privado no Rio de Janeiro, e re-identificação das mesmas, através de métodos fenotípicos, utilizando meio cromogênico e o equipamento vitek 2, assim como o teste de formação de tubo germinativo e produção de clamidósporos para C. albicans e C. dubliniensis. MALDI-TOF MS e PCR em tempo real também foram utilizados para autenticação das cepas e criação de um banco de leveduras, para fins de pesquisa científica e atividade de ensino. Foi selecionado o método de Castellani, para a manutenção e conservação dos microrganismos na Coleção de Candidíases invasiva continua sendo prevalente causa de morbidade e mortalidade em pacientes imunocomprometidos. Essa forma de candidíase é um dos aspectos mais polimórficos das micoses sistêmicas e, em muitos casos, é um achado terminal. Nas últimas décadas, as tecnologias para identificação de leveduras têm avançado significativamente, com métodos bioquímicos automatizados, ensaios baseados em análise de ácidos nucleicos e proteômicos. Particularmente a proteômica na sua versão Espectrometria de Massas por Tempo de Voo (MALDI-TOF MS), tem se apresentado como uma alternativa promissora para a identificação na rotina de espécies de leveduras. O presente trabalho, teve como objetivo a recuperação de leveduras isoladas de amostras clínicas, a partir de frascos de hemocultura, provenientes do serviço de microbiologia de um hospital privado no Rio de Janeiro, e re-identificação das mesmas, através de métodos fenotípicos, utilizando meio cromogênico e o equipamento vitek 2, assim como o teste de formação de tubo germinativo e produção de clamidósporos para C. albicans e C. dubliniensis. MALDI-TOF MS e PCR em tempo real também foram utilizados para autenticação das cepas e criação de um banco de leveduras, para fins de pesquisa científica e atividade de ensino. Foi selecionado o método de Castellani, para a manutenção e conservação dos microrganismos na Coleção de Leveduras. Nesse estudo, foram analisados 112 isolados de leveduras, sendo observado, dentre as espécies, as seguintes taxas de recuperação: C. tropicalis (27,7%), complexo C. albicans (21,6%), complexo C. parapsilosis (20,7%), complexo C. glabrata (16,2%), C. krusei (3,6%), C. haemuloni (1,8%). Dentre as espécies com o menor percentual de isolamento, foram encontradas: C. dubliniensis, C. famata, complexo C. guilliermondii, C. pelicullosa, C. utilis (0,9%) e outras espécies de leveduras (4,5%). Foi possível verificar o bom desempenho do MALDI-TOF MS frente aos métodos fenotípicos para a caracterização das leveduras assim como sua boa correlação com o PCR em tempo real. Através dessa pesquisa, foram elaborados os protocolos técnicos, formulários e bem como Compêndio de Métodos e de Boas Práticas em Coleção de Cultura de Leveduras. O presente estudo permitiu a recuperação de cepas de leveduras de interesse clínico para autenticação, através das metodologias fenotípicas e genotípicas e criação de um banco de microrganismos para atender à demanda de pesquisa do Instituto de Biologia do Exército.
Abstract:	Invasive candidiasis continues to be a prevalent cause of morbidity and mortality in immunocompromised patients. This form of candidiasis is one of the most polymorphic aspects of systemic mycoses and, in many cases, is a terminal finding. In the last decades, yeast identification technologies have advanced significantly, with automated biochemical methods, assays based on nucleic acid and proteomic analysis. Particularly the proteomics in its version Mass Spectrometry by Time of Flight (MALDI-TOF MS), has been presented as a promising alternative for the identification in the routine of species of yeasts. The objective of this study was to recover isolated yeasts from clinical samples from blood culture bottles from the microbiology department of a private hospital in Rio de Janeiro, and to re-identify them using phenotypic methods using chromogenic medium and vitek 2 equipment, as well as the test of germ-tube formation and production of chlamydospores for C. albicans and C. dubliniensis. MALDI-TOF MS and real-time PCR were also used for strains authentication and creation of a yeast bank for purposes of scientific research and teaching activity. The Castellani method was selected for the maintenance and conservation of the microorganisms in the Yeast Collection. In the present study, 112 isolates of yeasts were analyzed. Among the species, the following recovery rates were observed: C. tropicalis (27.7%), C. albicans complex (21.6%), C. parapsilosis complex (20.7%), C. glabrata complex (16.2%), C. krusei (3.6%), C. haemuloni (1.8%). Among the species with the lowest percentage of isolation were: C. dubliniensis, C. famata, C. guilliermondii, C. pelicullosa, C. utilis (0.9%) and other species of yeasts (4.5%). . It was possible to verify the good performance of MALDI-TOF MS against the phenotypic methods for the characterization of yeasts as well as their good correlation with real-time PCR. Through this research, the technical protocols, forms and as well as Compendium of Methods and Good Practices in Yeast Culture Collection were elaborated. The present study allowed the recovery of yeast strains of clinical interest for authentication through phenotypic and genotypic methodologies and creation of a microorganism bank to meet the research demand of the Institute of Biology of the Army.
Palavras-chave:	Systemic candidiasis Blood culture Identification of yeasts MALDI-TOF MS Leveduras bank Candidíase sistêmica Hemocultura Identificação de leveduras MALDI-TOF MS PCR em tempo real Banco de leveduras
Área(s) do CNPq:	CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::MICROBIOLOGIA APLICADA::MICROBIOLOGIA MEDICA
Idioma:	por
País:	Brasil
Instituição:	Universidade do Estado do Rio de Janeiro
Sigla da instituição:	UERJ
Departamento:	Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas
Programa:	Programa de Pós-Graduação em Saúde, Medicina Laboratorial e Tecnologia Forense
Citação:	Pinheiro, Eliane Olmo. Identificação genotípica e fenotípica de leveduras de importância clínica para autenticação em banco de dados de leveduras de Instituição Militar de Saúde. 2019. 139 f. Dissertação (Mestrado em Saúde, Medicina Laboratorial e Tecnologia Forense) – Instituto de Biologia Roberto Alcântara Gomes, Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2019.
Tipo de acesso:	Acesso Aberto
URI:	http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/17838
Data de defesa:	29-Mar-2019
Aparece nas coleções:	Mestrado Profissional em Saúde, Medicina Laboratorial e Tecnologia Forense

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