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http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/22508
Tipo do documento: | Tese |
Título: | Modulação de macrófagos murinos pelo Glucantime |
Título(s) alternativo(s): | Macrophage murine modulation of Glucantime |
Autor: | Siqueira, Larissa Moreira ![]() |
Primeiro orientador: | Silva, Silvia Amaral Gonçalves da |
Primeiro membro da banca: | Dutra, Patrícia Maria Lourenço |
Segundo membro da banca: | Rodrigues, Luciana Silva |
Terceiro membro da banca: | Pinto, Eduardo Fonseca |
Quarto membro da banca: | Andrade Neto, Valter Viana de |
Resumo: | No Brasil e na maioria dos países endêmicos, os antimoniais pentavalentes, tais como o Glucantime, são usados como terapia de primeira escolha tratamento das leishmanioses. Embora seu mecanismo de ação não seja completamente esclarecido, sua ação antiparasitária se dá principalmente após redução do antimônio pentavalente (SbV) para trivalente (SbIII) sobre as formas amastigotas intracelulares de Leishmania spp. O SbIII compromete o potencial redox levando danos a cadeia respiratória, e atua sobre a topoisomerase II danificando o DNA do parasito. Alguns estudos apontam para a ação dos antimoniais sobre a célula hospedeira, mostrando aumento na capacidade fagocítica e na produção de TNF por fagócitos. O objetivo deste trabalho foi investigar a capacidade do Glucantime modular a funcionalidade de macrófagos residentes de peritônio murino. In vitro avaliamos o efeito do tratamento direto com Glucantime (0-10 mg/mL) por 24-48h em monocamadas de macrófagos murinos peritoneais. In vivo, tratamos camundongos swiss por 5 dias consecutivos com 8 mg de Glucantime pela via intraperitoneal (IP) ou pela via intramuscular (IM) e obtivemos os macrófagos peritoneais. Avaliamos nesses macrófagos a sua capacidade fagocítica (usando beads fluorescentes) e ação microbicida (amastigotas intracelulares de L. braziliensis e Trypanosoma cruzi), produção de óxido nítrico (reagente de Griess) e perfil de citocinas (método CBA). Os resultados mostraram que nas concentrações até 20 mg/ml, o Glucantime não alterou a viabilidade dos macrófagos in vitro. A capacidade fagocítica e a produção de NO não foi alterada frente ao tratamento com o Glucantime. Quando previamente tratados com Glucantime, os macrófagos demonstraram capacidade microbicida aumentada para T. cruzi, mas sem correlação direta com produção de NO nas condições testadas. Os macrófagos tratados com Glucantime demonstraram produção aumentada de TNF e IL-6, mas após a infecção com L. braziliensis, os níveis de TNF e IL-6 diminuíram,bem como os níveis de IL-10 de maneira dose-dependente. Entretanto, a razão TNF/ IL-10mostrou tendência ao perfil inflamatório dos macrófagos estando eles infectados ou não. Em macrófagos oriundos de animais tratados in vivo com Glucantime, tanto IP como IM,observamos tendência ao aumento de citocinas pró-inflamatórias, sendo confirmado pela razão TNF/IL-10 (p<0,05). Macrófagos oriundos de animais tratados pela via IM,apresentaram aumento na capacidade microbicida para amastigotas intracelulares tanto de L. braziliensis (p<0,05) quanto de T. cruzi (p<0,05), sem correlação com produção de NO nas condições testadas. Esses resultados sugerem que o Glucantime é capaz de modular os macrófagos para um estado pró-inflamatório que pode contribuir para o efeito antiparasitário do fármaco. |
Abstract: | In Brazil and in most endemic countries, pentavalent antimonials, such as Glucantime, are used as first-line treatment for leishmaniasis. Although its mechanism of action is not fully understood, its antiparasitic action occurs mainly after reduction of pentavalent antimony (SbV) to trivalent (SbIII) on the intracellular amastigote forms of Leishmania spp. SbIII compromises the redox potential causing damage to the respiratory chain, and acts on topoisomerase II, damaging the DNA of the parasite. Some studies point to the action of antimonials on the host cell, showing an increase in phagocytic capacity and in the production of TNF by phagocytes. The aim of this study was to investigate the ability of Glucantime to modulate the functionality of murine peritoneum resident macrophages. In vitro we evaluated the effect of direct treatment with Glucantime (0-10 mg / mL) for 24-48h on monolayers of murine peritoneal macrophages. In vivo, we treated Swiss mice for 5 consecutive days with 8 mg of Glucantime intraperitoneally (IP) or intramuscular (IM) and obtained the peritoneal macrophages. We evaluated in these macrophages their phagocytic capacity (using fluorescent beads) and microbicidal action (intracellular amastigotes of L. braziliensis and Trypanosoma cruzi), production of nitric oxide (Griess reagent) and cytokine profile (CBA method). The results showed that at concentrations up to 20 mg / ml, Glucantime did not alter the viability of macrophages in vitro. Phagocytic capacity and NO production did not change with Glucantime treatment. When previously treated with Glucantime, macrophages demonstrated increased microbicidal capacity for T. cruzi, but without direct correlation with NO production under the conditions tested. Glucantime-treated macrophages demonstrated increased production of TNF and IL-6, but after infection with L. braziliensis, TNF and IL-6 levels decreased as well as IL-10 levels in a dose-dependent manner. However, the TNF / IL-10 ratio showed a tendency to the inflammatory profile of the macrophages being infected or not. In macrophages from animals treated in vivo with Glucantime, both IP and IM, we observed a tendency to increase proinflammatory cytokines, being confirmed by the ratio TNF / IL-10 (p <0.05). Macrophages from animals treated with the IM path showed increased microbicidal capacity for intracellular amastigotes of both L. braziliensis (p <0.05) and T.cruzi (p <0.05), without correlation with NO production in the conditions tested. These results suggest that Glucantime is able to modulate macrophages to a proinflammatory state that may contribute to the antiparasitic effect of the drug. |
Palavras-chave: | Glucantime Macrophage Immunomodulation Antimonial pentavalente Macrófagos peritoneais Modulação antigênica Leishmaniose Antimoniato de meglumina Muridae |
Área(s) do CNPq: | CIENCIAS BIOLOGICAS::PARASITOLOGIA::PROTOZOOLOGIA DE PARASITOS::PROTOZOOLOGIA PARASITARIA HUMANA |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Instituição: | Universidade do Estado do Rio de Janeiro |
Sigla da instituição: | UERJ |
Departamento: | Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas |
Programa: | Programa de Pós-Graduação em Microbiologia |
Citação: | SIQUEIRA, Larissa Moreira. Modulação de macrófagos murinos pelo Glucantime. 2019. 83 f. Tese (Doutorado em Microbiologia) – Faculdade de Ciências Médicas, Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2019. |
Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/22508 |
Data de defesa: | 16-Jul-2019 |
Aparece nas coleções: | Doutorado em Microbiologia |
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