Investigação da infertilidade masculina

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Tipo do documento:	Tese
Título:	Investigação da infertilidade masculina
Título(s) alternativo(s):	Male infertility investigation
Autor:	Souza, Paula Fontoura Coelho de
Primeiro orientador:	Ramos, Cristiane da Fonte
Primeiro membro da banca:	Moura, Roberto Soares de
Segundo membro da banca:	Vaz, George Queiroz
Terceiro membro da banca:	Araújo, Luiz Felipe Bittencourt de
Quarto membro da banca:	Aiub, Claudia Alessandra Fortes
Resumo:	A leptina e seu receptor estão presentes nos espermatozoides, no entanto, seu papel sobre a função espermática ainda é controverso. Trabalhos recentes mostram que a leptina diminui o estresse oxidativo, que é considerado uma causa de infertilidade e tem efeitos deletérios sobre a fragmentação do DNA (fDNA) espermático e a sobrevida dos espermatozoides após o descongelamento. Assim como a leptina, a literatura tem apontado o hormônio peptídeo similar ao glucagon (GLP-1) como um potencial regulador da função reprodutiva. Este hormônio tem sido utilizado para o tratamento de diabetes tipo 2, porém, devido à sua curta meia vida, foram criados agonistas do receptor do GLP-1 com maior meia vida, como é o caso da liraglutida. O presente estudo relatou um caso de azoospermia relacionado ao uso do liraglutida, dessa forma, se fez necessário aprofundar a avaliação de seus efeitos sobre o sistema reprodutor masculino. O objetivo deste estudo foi investigar a função dos hormônios leptina e liraglutida sobre a função espermática. Participaram deste estudo 114 indivíduos normospérmicos provenientes de laboratório especializado em reprodução assistida. Para a avaliação do efeito da leptina, as amostras de espermatozoides sofreram congelamento e descongelamento, com e sem capacitação, seguida por incubação em meio acrecido ou não com leptina. Antes e após o congelamento, foi realizada fDNA através da técnica de Sperm Chromatin Dispersion. Os parâmetros de estresse oxidativo foram mensurados através de espectrofotometria. O caso do paciente azoospérmico com uso do liraglutida foi publicado em forma de relato de caso e para entender o processo pelo qual a liraglutida pode ter afetado a espermatogênese, se fez necessário avaliar a presença do receptor do GLP-1 nos espermatozoides humanos e testículos de camundongos através da técnica de Western Blotting, pois este dado ainda não foi descrito na literatura. Foi realizada ainda a incubação in vitro de espermatozoides com liraglutida e analisado seu efeito na função espermática através da análise das taxas de motilidade e vitalidade. Para análise estatística dos resultados, foi utilizado o teste t pareado para comparar os grupos antes e após o congelamento, também foi utilizado o teste ANOVA de medidas repetidas, seguida pelo pós teste de Holm-Sidak para comparar os grupos antes e após incubação dos espermatozoides com diferentes concentrações de leptina e de liraglutida. Considerou-se estatisticamente significante quando p≤0,05. Foi observado um aumento significativo da fDNA espermático após o descongelamento, comparado às amostras a fresco. A adição de leptina às amostras capacitadas antes do congelamento reduziu as taxas de fDNA e aumentou a atividade de enzimas antioxidantes. Detectamos a expressão protéica do receptor do GLP-1 em espermatozoides humanos e em testículos de camundongos e a liraglutida reduziu a taxa de motilidade espermática. A leptina e liraglutida estão envolvidas na regulação espermática. A adição de leptina às amostras capacitadas reduziu a fDNA e o estresse oxidativo melhorando a qualidade espermática no pós-descongelamento. Verificamos que tanto os espermatozoides humanos, quanto os testículos de camundongos, expressam o receptor do GLP-1. A incubação in vitro dos espermatozóides com liraglutida reduziu a taxa de motilidade progressiva, e o relato de caso sugere que a liraglutida causou uma interrupção da espermatogênese, sendo restabelecida com a suspensão do medicamento.
Abstract:	Leptin and its receptor are present in spermatozoa, however, its role on sperm function is still controverse. Recent studies show that leptin reduces oxidative stress, which is considered an infertility cause and has deleterious effects on sperm DNA fragmentation (DNAf) and sperm survival after thawing. As well as leptin, literature has indicated the hormone glucagon-like peptide (GLP-1) as a potential regulator of reproductive function. This hormone has been recommended for type 2 diabetes treatment. However, because of its short half life, GLP-1 agonists have been created with a longer half life, for example, liraglutide. This study reported a case of azoospermia related to liraglutide use, therefore, we found important to evaluate its effects on male reproductive system. The aim of this study was to investigate the function of the hormones leptin and liraglutide on sperm function. Participated on this study 114 normospermic patients from a specialized assisted reproductive laboratory. For the evaluation of leptin effect, sperm samples were frozen and thawed, with or without capacitation, followed by incubation in culture media supplemented or not with leptin. fDNA was evaluated through Sperm Chromatin Dispersion assay, before and after freeze-thaw cycle. The case of the azoospermic patient after liraglutide use was published as a case report and, for better understanding the mechanisms by which liraglutide could have affected spermatogenesis, we evaluated GLP-1 expression in human spermatozoa and mouse testis through Western Blotting technique, once these data are not present in literature. We also incubated sperm and liraglutide in vitro to study its possible effects on sperm function, by analysis of motility and vitality rates. For statistical analysis, we used paired t test to compare groups before and after freeze-thaw cycle, repeated measures ANOVA followed by Holm-Sidak test to compare groups before and after incubation with different concentrations of leptin and liraglutide hormones. Statistical significance was considered when p≤0,05. This study showed a significant increase in post-thaw sperm DNAf, compared to fresh samples. The addition of leptin to capacitated samples before freezing reduced DNAf rates and enhanced sperm antioxidant enzymes activity. We detected the presence of GLP-1 receptor in human spermatozoa and in mouse testis. Liraglutide reduced sperm motility, but not sperm vitality. Through the analysis of the hormones leptin and GLP-1, we found that both are involved in sperm regulation. Leptin incubation reduced DNAf and oxidative stress, improving post-thaw sperm quality. We detected that both human sperm and mouse testis express GLP-1 receptor. In vitro incubation of sperm with liraglutide reduced progressive motility rates, and the case report suggests that liraglutide has lead to an arrest on spermiogenesise, which was restored after medication interruption.
Palavras-chave:	Spermatozoa Leptin Liraglutide Oxidative stress Fertility Espermatozoides Leptina Liraglutida Estresse oxidativo Fertilidade Espermatozoides Leptina Stress oxidativo Estresse oxidativo Fecundidade
Área(s) do CNPq:	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA
Idioma:	por
País:	BR
Instituição:	Universidade do Estado do Rio de Janeiro
Sigla da instituição:	UERJ
Departamento:	Centro Biomédico::Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes
Programa:	Programa de Pós-Graduação em Biologia Humana e Experimental
Citação:	SOUZA, Paula Fontoura Coelho de. Investigação da infertilidade masculina. 2016. 69 f. Tese (Doutorado em Biologia Humana) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de janeiro, 2016.
Tipo de acesso:	Acesso Aberto
URI:	http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/7797
Data de defesa:	29-Jul-2016
Aparece nas coleções:	Doutorado em Biologia Humana e Experimental

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