Detecção rápida de resistência aos fármacos de segunda linha (fluroquinolonas, amicacina e canamicina) em cepas de Mycobacterium tuberculosis utilizando o método Multiplex allele-specific   PCR (MAS-PCR)

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Tipo do documento:	Dissertação
Título:	Detecção rápida de resistência aos fármacos de segunda linha (fluroquinolonas, amicacina e canamicina) em cepas de Mycobacterium tuberculosis utilizando o método Multiplex allele-specific PCR (MAS-PCR)
Título(s) alternativo(s):	Rapid detection of resistance to second-line drugs (fluoroquinolones, amikacin and kanamycin) in Mycobacterium tuberculosis strains by using the Multiplex allele-specific PCR (MAS-PCR)
Autor:	Costa, Bianca Porphírio da
Primeiro orientador:	Siqueira, Hélio Ribeiro de
Primeiro coorientador:	Redner, Paulo
Primeiro membro da banca:	Amadeu, Thaís Porto
Segundo membro da banca:	Ferreira, Prescilla Emy Nagao
Terceiro membro da banca:	Montes, Fátima Cristina Onofre Fandinho
Resumo:	A tuberculose mantém-se como uma das principais causas de morte, provocadas por um único agente infeccioso, em todo o mundo. Deficiências no processo de detecção da doença, assim como falência de alguns procedimentos terapêuticos (por exemplo, em função do abandono do tratamento por parte do paciente), tem contribuído para o surgimento de bactérias resistentes a um ou mais antibióticos (MDR resistência a múltiplas drogas, e XDR extensivamente resistente a drogas), constituindo um problema grave e uma verdadeira ameaça aos programas de controle da tuberculose. Este estudo teve como objetivo identificar com rapidez cepas de Mycobacterium tuberculosis (MTB) resistentes as fluoroquinolonas (FLQs), à amicacina (AMK) e à canamicina (KAN) por mutações pontuais nos genes gyrA (códon 94) e rrs (códon 1401), respectivamente. A metodologia utilizada foi o MAS-PCR (Multiplex allele-specific - PCR) que se baseia na amplificação por PCR e na detecção simultânea de mutações pontuais mais frequentemente associadas à resistência aos fármacos FLQs, AMK e KAN em cepas de MTB. Cem cepas de M. tuberculosis pertencentes ao acervo do Laboratório de Referência Nacional de Tuberculose CRPHF/ENSP/FIOCRUZ foram analisadas pelo método MAS-PCR, e comparadas aos resultados obtidos previamente pelo método bacteriológico e automatizado BACTEC MGIT 960. Os resultados mostraram discordância entre o método molecular MAS-PCR e o método fenotípico MGIT 960 (42% no gene gyrA e 32% no gene rrs). Os resultados discordantes foram analisados pela análise de sequenciamento, mostrando que a sensibilidade do método MAS-PCR com o gene gyrA foi de 71,4% e com o gene rrs foi de 52,5%. O baixo valor de sensibilidade foi devido ao fato de que algumas cepas resistentes não apresentaram mutação na posição analisada pelo MAS-PCR, o que pode significar que as cepas de MTB resistentes presentes no Brasil têm uma singularidade no padrão de mutações, diferente do descrito no resto do mundo.
Abstract:	Tuberculosis remains one of the main causes of death caused by a single infectious agent worldwide. Deficiencies in the disease detection process as well as failure of some therapeutic procedures (e.g., due to the abandonment of the treatment by the patient) has contributed to the emergence of bacteria resistant to one or more antibiotics (MDR - multidrug resistance and XDR - extensively drug-resistant), constituting a serious problem and a real threat to tuberculosis control programs. This study aims to quickly identify strains of Mycobacterium tuberculosis (MTB) resistant to fluoroquinolones (FLQs), amikacin (AMK) and kanamycin (KAN) by point mutations in gyrA genes (codon 94) and rrs (codon 1045), respectively. The methodology used was the MAS-PCR (Multiplex Allele-Specific - PCR) which is based on PCR amplification and simultaneous detection of point mutations most frequently associated with resistance to FLQs, AMK and KAN in MTB strains. One hundred M. tuberculosis strains belonging to the collection of National Reference Laboratory for Tuberculosis / CRPHF / ENSP / FIOCRUZ were analyzed by MAS-PCR method and compared to the results obtained previously by bacteriological and automated method BACTEC MGIT 960. The results showed disagreement between the MAS-PCR molecular method and phenotypic method MGIT 960 (42% in the gyrA gene and 32% in the rrs gene). The discordant results were analyzed by sequence analysis, showing that the sensitivity of the MAS-PCR method with the gyrA gene was 71.4% and the rrs gene was 52.5%. The low value of sensitivity is due to the fact that some resistant strains showed no mutation at the position analyzed by MAS-PCR, which may mean that the resistant MTB strains present in Brazil have a singularity in the pattern of mutations, other than described in the rest of the world.
Palavras-chave:	MAS-PCR. M. tuberculosis. MGIT. Amikacin Kanamycin Ofloxacin Fluoroquinolones MAS-PCR M. tuberculosis MGIT Amicacina Canamicina Ofloxacina Fluoroquinolonas Mycobacterium tuberculosis Tuberculose Amicacina Fluoroquinolonas
Área(s) do CNPq:	CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA::CLINICA MEDICA
Idioma:	por
País:	BR
Instituição:	Universidade do Estado do Rio de Janeiro
Sigla da instituição:	UERJ
Departamento:	Centro Biomédico::Faculdade de Ciências Médicas
Programa:	Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas
Citação:	COSTA, Bianca Porphírio da. Detecção rápida de resistência aos fármacos de segunda linha (fluroquinolonas, amicacina e canamicina) em cepas de Mycobacterium tuberculosis utilizando o método Multiplex allele-specific PCR (MAS-PCR). 2016. 56 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2016.
Tipo de acesso:	Acesso Aberto
URI:	http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/8838
Data de defesa:	30-Jun-2016
Aparece nas coleções:	Mestrado em Ciências Médicas

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